摘要目的：采用胶束电动毛细管色谱法对当归中的有效成分阿魏酸和腺苷同时进行含量测定。方法：采用熔融石英毛细管柱（50μm×66.5cm，有效长度58cm）作为分离通道；以50mmol/L硼砂和10mmol/L 去氧胆酸钠并且含2％甲醇的溶液（pH 9.6）为运行缓冲液；运行电压24kV；毛细管柱温20℃ ；检测波长：210nm。结果：以戊巴比妥钠为内标，阿魏酸和腺苷分别在20～320 μg/ mL和10～160μg/mL浓度范围内线性关系良好（r>0.998）；回收率分别为96.8％～97.4％和93.2％～95.0％；重复性试验RSD分别为4.7％和6.8％（ =5）。结论：本法操作简便、快速，回收率较好，重现性好。

关键词:胶束电动毛细管色谱;当归;阿魏酸腺苷
当归是伞形科植物当归Angelica sinensis（Oliv．）Diels的干燥根，是著名的活血补血药。文献报道其含有挥发油和水溶性成分，阿魏酸是其主要有效成分之一，具有抗氧化和抗自由基作用，能有效抑制血小板聚集和血栓形成，其含量测定方法有高效液相色谱法L2 和高效毛细管电泳法等。腺苷也是当归中成分之一，具有抑制血小板聚集和调节腺苷酸环化酶活性等作用，但对当归中腺苷的测定，作者还未见文献报道。由于当归药材中成
分十分复杂，在用HPLC分析时，色谱柱极易受到挥发油物质的污染，导致柱寿命缩短。本研究采用胶束电动毛细管色谱法同时测定了当归中阿魏酸和腺苷的含量，具有柱效高、分析时间短和费用低的特点，实验结果表明，该方法样品前处理简便，回收率较好，重现性好。
1 仪器与试药
HP3 G16OOA型高效毛细管电泳仪，HP化学工作站，二极管阵列检测器，自动进样器；日本Shimadzu LIBROR AEL一160 电子天平；北京Autoscience AS5150A超声波清洗器；阿魏酸（批号0773—9910）、腺苷对照品均购自药品生物制品检定所；去氧胆酸钠为分析纯（Fluka，瑞士）；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯；当归药材购于沈阳市药材公司，经沈阳药科大学药用植物研究室孙启时教授鉴定为伞形科植物Angelica sinensis（Oliv．）Diels的干燥根。
2 毛细管电泳条件
未涂层石英毛细管5Om×66.5cm，有效长度58cm（河北永年锐沣色谱器件有限公司）；检测波长：210nm；压力进样：5kPa，5s；分离电压：24kV；毛细管温度：20℃；运行缓冲液：50mmol/L 硼砂和10mmol/L去氧胆酸钠，并含有2％ 甲醇（pH9.6）。毛细管柱使用前以1mol/L氢氧化钠溶液、重蒸馏水和运行缓冲液依次冲洗5，5，8 min，每次电泳后以运行缓冲液冲洗8min。在此条件下，阿魏酸和腺苷的分离情况。
3 溶液的制备
3．1 对照品溶液精密称取阿魏酸对照品40mg、腺苷对照品20mg，用60％甲醇溶解，并定容至50.0mL，混匀待用。
3．2 供试品溶液精密称取60℃干燥的当归粉末2.0g，用60％乙醇20mL超声提取20min，3000 r/min离心10min，取上清液，残渣同法重复提取2次，合并上清液，减压回收溶剂，用60％ 甲醇定容至10mL，再经0.45μm滤膜滤过后得供试品溶液。
4 线性关系的考察
精密吸取对照品溶液0.25，0.5，1.0，1.5，2.0，4.0mL置10mL量瓶中，加60％甲醇至刻度，混匀后分别进样，记录各自峰面积，以阿魏酸、腺苷与戊巴比妥钠的峰面积比l，为纵坐标，浓度X（μg/mL ）为横坐标进行线性回归，得阿魏酸、腺苷的回归方程分别为：
Y=160.3X +0.1540 r=0.9992
Y=9256X +0.1989 r=0.9986
两者的线性范围分别为20～320μg /mL，10～160μg /mL 。
5 精密度试验
取对照品溶液1.5mL置10mL量瓶中，加60％甲醇至刻度，混匀后连续进样5次，按阿魏酸与内标的峰面积比计算得RSD为4.4％；按腺苷与内标的峰面积比计算得RSD为3.2％ 。
6 重复性试验
称取60℃干燥的当归粉末5份，每份2.0 g，依法制备供试品溶液，按照“毛细管电泳条件”项下进行测定，以阿魏酸含量计算得RSD为4.7％；以腺苷的含量计算得RSD为6.8％。
7 回收率试验
精密吸取对照品溶液0.25mL和1.25mL。分别加到2.0g已知含量的当归药材中（阿魏酸：0.269mg/g，腺苷：0.202 mg/g），依法制备供试品溶液，按照“毛细管电泳条件”项下进行测定，阿魏酸的平均回收率在96.8％ ～97.4％之间，腺苷的平均回收率在93.2％ ～95.0％ 之间，RSD在6.4％ 以内，n=3。
8 样品的测定
取10个不同产地的当归样品，依法制备供试品溶液进行测定。
9 讨论
9．1 提取方法的选择 采用平行试验对回流法、煎煮法和超声波法进行了预试验比较，结果表明：以阿魏酸和腺苷的含量计算，煎煮法的提取率低，回流法和超声波法的提取率基本一致，鉴于超声波法简单、省时，故本实验采用超声波法。
9．2 提取工艺的优化 阿魏酸溶于热水、醇、乙酸乙酯和乙醚，腺苷易溶于水，故选用含一定量水的乙醇溶液来提取。采用正交试验设计优化当归的提取工艺，考察了提取时间、溶剂用量和溶剂浓度各因素对提取效率的影响，以阿魏酸和腺苷的含量为考察指标，对正交试验结果进行综合评价，优选出佳提取工艺条件为用60％乙醇20mL，超声提取20min，共3次。
9．3 运行缓冲液的选择实验中，首先考察了10～100mmol/L硼砂缓冲液，进行毛细管区带电泳测定，结果发现，阿魏酸、腺苷未能与相邻峰分离，后改为50mmol/L硼砂中加入5～100mmol/L去氧胆酸钠，进行胶束电动毛细管色谱分离，结果以本文缓冲液50mmol/L硼砂，10mmol/L去氧胆酸钠并且含2％甲醇的分离效果佳。
9．4 缓冲液pH对分离的影响 本文考察了缓冲液pH在3.5～11.0间对阿魏酸、腺苷与相邻峰的分离度的影响，当pH在8.5以下时，几乎无法将二者与相邻峰分开，而pH在9.2～9.8之间，阿魏酸、腺苷与相邻峰可达到基线分离。
9．5 运行电压的选择 当运行电压升至28 kV时，腺苷和阿魏酸的迁移速度加快，但分离度下降；当运行电压降到20 kV时，迁移时间延长，综合考虑对分离度和迁移时间的影响，本文选择运行电压为24 kV。
9．6 峰纯度检测 通过比较在线紫外吸收光谱和加入对照品溶液的方法，指认阿魏酸和腺苷的色谱峰；同时利用HP化学工作站中的峰纯度检查功能，再对阿魏酸和腺苷的色谱峰纯度进行评价，当二者紫外光谱的匹配因子大于950时对其定量，避免了色谱峰不纯对定量带来的误差。
参考文献
1 ZHENGHu—zhan（郑虎占），DONG ze—hong（董泽宏），SHE Jing（余靖）．Modem Research and Application of Traditional Chinese Medicine（中药现代研究与应用）．Beijing（北京）：Xueyan Press（学苑出版社），1998．206