摘要：目的:应用高效毛细管电泳法（HPCE）测定不同种类甘草药材中甘草酸的含量。方法:缓冲液3Omol/L硼酸盐溶液，pH=9.2，未涂层弹性石英毛细管（75μmX 47.5cm，有效分离长度40cm）为分离通道，压力进样（250 Kpa·S），20kV恒压电泳（25℃）分离，254nm检测。结果 整个分析过程可以在7min以内完成，甘草酸含量的线性范围为O～500μg/ml。（r=0.999 7）。甘草酸的保留时间与甘草酸积分峰面积的RSD值分别为0.2%和3.4%。结论:该方法简洁、快速，重现性较好，适用于甘草药材中甘草酸含量的快速测定，也为进一步建立甘草药品的指纹图谱提供了可行性依据．并且，可以同时分析甘草酸的水解产物-甘草次酸，可用于进一步研究甘草类药物的代谢。
关键词：毛细管电泳，甘草，甘草酸，甘草次酸，指纹图谱
甘草为豆科多年生草本植物甘草（Glscyrrhizauralensis Fisch．）的干燥根茎，性味甘平，入十二经。功效补脾益气、清热解毒、润肺止咳、缓急止痛、调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，腕腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒、缓解药物毒性、烈性。甘草药材的主要活性成分是甘草酸，研究证明它对心血管系统、呼吸系统、消化系统和内分泌系统疾病有很好的疗效，并且具有抗炎、抗变态反应、抗氧化作用、抗过敏作用、解毒作用、抗病源微生物和抗癌作用，近，德国学者J Cinatl等的报道表明甘草酸对SARS的治疗具有一定作用 。甘草解毒作用的有效成分为甘草酸，一分子甘草酸水解后产生一分子甘草次酸和两分子葡萄糖醛酸，与含有羟基的毒物结合解毒 。目前对甘草药材中化学成分的研究多采用高效液相色谱法（HPLC），但是对于一些在色谱柱上保留非常强的物质如甘草次酸，由于分离时间相当长，无法用HPLC进行分析。高效毛细管电泳技术（HPCE）同时兼有电泳与色谱的双重分离特点，谱图所反映的信息比液相色谱图更为详尽、全面，在分析甘草药品时能同时检测出甘草酸及其水解产物甘草次酸，分析过程不超过7min。本文建立了一种高效毛细管电泳法，能够同时分离甘草的主要化学成分甘草酸及其水解产物甘草次酸，并且比较了7种不同种类甘草药材中甘草酸
含量的差异，方法简洁、快速，重现性令人满意，普遍适用于甘草药物的药理研究。
1 仪器和试剂
仪器：HP3DCE毛细管电泳系统（美国HP公司），DAD检测器；未涂层弹性石英毛细管柱（河北永年光导纤维厂）；Orion 828型pH 测试仪（美国Orion公司）；HD0208超声波仪；“丽厨”多功能食品粉碎机；Milli-Q超纯水装置。
试剂：甘草酸单铵盐及甘草次酸化学对照品（药品生物制品检定所提供）；硼砂、氢氧化钠（分析纯，上海化学试剂公司）；超纯水；甘草药材由内蒙古亿利公司提供。
2 电泳条件
以30mmol/L硼酸盐（pH 9.2）缓冲液为电泳介质，未涂层弹性石英毛细管（75μm×50cm，有效分离长度42.2cm）为分离通道，压力进样（250Kpa·S），20 kV恒压电泳（25℃）分离，254nm检测。实验前缓冲液用超声波脱气10min，毛细管使用前分别用H2O、0.1mol/L的NaOH、1mol/L的NaOH、0.1mol/L的NaOH和H2O各冲洗10min、10 min、15 min、10min、10min，每次电泳前用电泳介质冲洗3min。
3 溶液配置
3．1 标准溶液的配置 准确称量0.050g甘草酸单铵盐，以水为溶剂，定容于50mL容量瓶中作为甘草酸单铵盐对照品储备液（1000μg/mL）。准确称量0.050g甘草次酸，以乙醇为溶剂，定容于50mL容量瓶中作为甘草次酸对照品储备液（1000μg/mL）。
3．2 样品溶液的制备 样品来源：内蒙古鄂尔多斯“梁外”甘草GAP基地；采收时间：2002年3月；提取方法：根据本实验室前实验结果，采用超声波提取以获得佳提取效率 ；提取步骤：准确称量1.00 g甘草样品，配置乙醇-水-氨水（10：90：0.5）提取液，用超声波提取30 min，定容50mL。取1mL该提取液置离心管中，高速离心（10 000rp），取离心后的上层清液过滤，待测。
4 结果与讨论
4．1 线性关系考察 分别配制0，100，300，500μg/mL 的甘草酸单氨盐标准溶液，进样测定。以甘草酸单铵盐标准品浓度X（μg/mL）为横坐标，积分峰面积值Y为纵坐标，计算回归方程为Y=0.4177X+0.578 7，（r=0.9997）。结果表明，在0～500μg/mL范围内，样品的信号随着浓度的增加呈现良好的线性关系。
4．2 精密度实验 取批号为Rg-X-002的样品，按照上述制备方法制备样品，在选定条件下，连续进样6次。
4．3 甘草样品的测定结果 实验比较了七种不同种类甘草中甘草酸含量的差异。
4．4 讨论本实验采用高效毛细管电泳法对甘草药材中主要化学成分进行了分离，整个分离过程在7min之内完成。运用该方法测定了7种不同种类甘草药材中甘草酸含量，测定结果表明：七种甘草中甘草酸的含量（%）顺序为：野生（乙级）> 野生（丙级）> 人工（乙级）> 人工（丙级）2年> 人工（丙级）3年；野生> 人工栽培；相同生长条件下，乙级> 丙级。此结果与既定等级分类一致。
与HPLC法比较，本实验方法更为简洁、快速，但是，HPCE法的重现性不如HPLC法，这使HPCE在建立中药材指纹图谱方面的应用受到了一定的限制。不过，如果将保留值改用相对保留值（保留时间改成相对保留时间；峰面积改成与内标物的峰面积比值）表示，则可以克服HPCE法缺点，使HPCE的性能与HPLC不相上下。下一步的工作将集中发展甘草药品的HPCE指纹图谱技术。
参考文献
[1] SUN Xiuying（孙秀英），HUANG Lijuan（黄丽娟），LIU Xia（刘霞）．Analysis of the chemical components in Glyeyrrhizauralensis Fisch．Acta Chin Medand Phar（中医药学报）．1994，5：40．