摘要：目的利用超临界CO2萃取结晶技术纯化穿心莲内酯。方法：采用系统观察法考察了超临界CO2萃取结晶分离对穿心莲内酯晶体形态、纯度、结晶量的影响，并采用扫描电镜、HPLC法分析结果。结果穿心莲内酯晶体形态随压力的升高而变细、变短；随着压力的升高，晶体纯度提高，结晶量增加。结论：超临界CO2能萃取并同步高效结晶分离穿心莲内酯，为开发高质量中药活性成分提供一条捷径。
关键词：穿心莲内酯；超临界C02流体萃取；结晶
穿心莲为爵科植物穿心莲Andrographis paniculata（Burm．f．）Nees的干燥地上部分。穿心莲主要活性部位为二萜内酯和黄酮类化合物，具有诱导细胞分化，保肝降酶及提高胆汁分泌量，并改变其物理特性等药理作用。穿心莲内酯类化合物临床上用于治疗急性胃肠炎、扁桃体炎、肝炎和抗癌等。为提高穿心莲内酯分离效率和产品纯度，笔者采用超临界流体萃取结晶技术对穿心莲内酯进行高效分离纯化。本文报道超临界CO2萃取结晶压力变化对穿心莲内酯晶体形态、纯度及结晶量的影响，同时考察了萃取结晶温度对纯度的影响。
1 材料和仪器
穿心莲浸膏（穿心莲内酯含量为30%）和穿心莲内酯原料（穿心莲内酯含量为98%）由合肥拓峰生物工程有限责任公司提供；穿心莲内酯对照品购于药品生物制品检定所；CO2食品级。
32MPa 1.6 L超临界CO2萃取一结晶装置；萃取结晶釜1.6 L（高径比为10：1）；Waters HPLC系统：515型输液泵，2487紫外双光束检测器；Hitachi X一650扫描电子显微镜（日本日立）。
2 方法和结果
2．1 色谱条件：色谱柱：Waters Symmetryshield C18（150mm×3.9mm，5μm）；流动相：甲醇-水（65：35）；流速：1.0 mL／min；检测波长：205 nm。
2．2 标准曲线的制备：精密称取穿心莲内酯对照品1.82mg，置于5mL量瓶中，用甲醇溶解并加至刻度，摇匀，得对照品贮备液。吸取该溶液1.0mL，转移至5mL量瓶中，定容至刻度，摇匀。依次进样2，6，10，14，18μL。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归。穿心莲内酯在0.12～1.30μg与峰面积线性关系良好，回归方程为：Y=3470+674X ，r=0.9990。
2．3 浸膏供试品溶液的制备：穿心莲浸膏用乙醇加热溶解，滤过，得滤液，测定得穿心莲内酯含量为45mg／mL。
2．4 结晶供试品溶液的制备：精密称取结晶产物2.00mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并加至刻度，摇匀，即得。
2．5 压力对晶体形态的改变：取穿心莲内酯置萃取釜中结晶器上，经超临界C02萃取一段时间后，结晶板上出现穿心莲内酯晶体薄层。晶体的扫描电镜。可见，经过超临界CO2萃取结晶后的穿心莲内酯晶体的形态随压力的升高，长方体晶体变细、变短。
2．6 压力对穿心莲内酯的影响
2．6．1 压力对穿心莲内酯含量的影响：控制萃取-结晶釜温度在50℃，萃取时间为90min，流量为20L／min，压力分别选择8，12，18，22 MPa。将结晶器自底从顶部平均分为3段，在中段取样。实验原料采用穿心莲浸膏，压力-穿心莲内酯含量变化曲线。
2．6．2 压力对穿心莲内酯结晶量的影响：萃取-结晶釜温度仍控制在50℃，萃取时间为90min，流量为20 L／min，压力分别选择为8，12，15，18，22MPa，仍在结晶器中段取样，实验原料采用穿心莲内酯原料，压力-穿心莲内酯质量分数（质量分数=局部结晶量／总结晶量）变化曲线。
2．7 温度对穿心莲内酯含量的影响：实验原料采用穿心莲浸膏。控制萃取-结晶釜压力在18MPa，萃取时间为90 min，流量为20L／min，温度分别选择为40℃，45℃，50℃，55℃，60℃。将结晶器自底从顶部平均分为3段，在中段取样。温度-穿心莲内酯含量变化曲线。可见在其他工艺参数不变的情况下，穿心莲内酯含量与温度基本也呈正相关，但影响程度较小，曲线变化平缓。
3 讨论
穿心莲内酯为二萜类化合物，相对黄酮类、生物碱类物质极性偏低，适于超临界CO2技术萃取；而通过乙醇改良，调和CO2极性，更有利于提高超临界CO2萃取极性较高、相对分子质量较大的天然活性物质。
在超临界状态下，萃取相平衡受外场作用，如结晶器干扰、表面吸附力、重力、分子间作用力等，结晶与溶解形成竞争，出现了穿心莲内酯同步萃取结晶；且压力越高，超临界CO2溶解度越大，单位时间成核数目越多，则晶体越短小。萃取压力越高，穿心莲内酯在超临界CO2中的溶解度越大，克服其他作用力的负面影响越强，可促
进穿心莲内酯晶体向结晶器上端生长。
因天然药物中活性成分部分为结晶性组份，在采用超临界技术开发该产品时，因萃取分离伴随结晶的现象，造成管道堵塞，此为超临界流体萃取技术发展的很大障碍。本实验所用的同步萃取结晶技术改良了传统超临界流体萃取分离工艺。
References：
E1] Matsuda T，Kuroyanagi M ，Della G，et．Cell differentiation—inducing diterpene from Andrographis paniculata Nees[J]．Chem Pharm Bull，1994，42（6）：1216—1225．